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細胞培養方法步驟

來源: 上海博湖生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/11/15 15:34:30 已瀏覽:
導讀:細胞培養方法步驟

培養方法如下:
1、將細胞稀釋到1000個細胞/mL,接種到24孔板,每孔1ml。
2、接種后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418濃度范圍內進行篩選。
3、每隔3天跟換1次培養液,保持G418濃度不變。
4、選擇出在10~14天內使全部死亡的G418濃度來進行下一步的篩選試驗。由于每種細胞對G418的敏感性不同,一般變動在100ug/ml~1000ug/ml范圍。
培養步驟:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將有細胞懸液加入培養瓶中培養*(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養*。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

(1)、 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

(2)、 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。

(3)、輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
(4)、 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法三:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。棄培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數量加入到凍存液中。
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